今年以來，新冠肺炎疫情在全球暴發，在這場沒有硝煙的戰爭中，病毒的感染診斷成為疫情防控重中之重。而此次新型冠狀病毒能夠在全國范圍內快速、高效的檢測，得益于我國體外診斷試劑的快速研發。

　　近年來，隨著生物技術的飛速發展，用于疾病診斷、指導用藥的IVD產品越來越多。試驗用樣本的保存、運輸及操作過程規范化的重要性日益突出，對提升體外診斷試驗樣本管理規范性，提高體外診斷試劑臨床試驗結果的可靠性至關重要。筆者結合本醫院開展的試驗項目，探討IVD臨床試驗樣本保存、運輸以及操作的特殊性。

　　IVD及其臨床試驗

　　體外診斷（IVD）試劑是在疾病的預防、診斷、治療監測、預后觀察、健康狀態評價以及遺傳性疾病的預測過程中，用于對人體樣本（各種體液、細胞、組織樣本等）進行體外檢測的試劑、試劑盒、校準品（物）、質控品（物）等。在我國，第二類、第三類IVD產品在獲得注冊進入市場前，為驗證產品的安全性、有效性及與“金標準”或目前臨床廣泛評價品質較好的已上市產品間的等效性，需開展臨床試驗。

　　IVD臨床試驗（包括與已上市產品進行的比較研究試驗）是指在相應的臨床環境中，對體外診斷試劑的臨床性能進行的系統性研究，其目的是確認產品的風險/受益比是否可接受，并確定產品的適用人群及適應證。臨床試驗的整個過程中樣本保存、運輸及操作環節對試驗結果的準確性起著關鍵的作用，是臨床試驗質量保證的重要環節，決定了上市后體外診斷試劑是否安全有效，直接關系到公眾身體健康。與藥物臨床試驗相比，IVD臨床試驗涉及的生物樣本類型多樣，具有臨床試驗樣本需求量大、試驗周期短的特點。

　　臨床試驗樣本的保存

　　根據體外診斷試劑臨床試驗樣本量要求，第三類產品臨床試驗的總樣本數至少1000 例，第二類產品臨床試驗的總樣本數至少 200 例。因此，相對于藥物或器械臨床試驗，體外診斷試劑臨床試驗需要的樣本量較大，實際上常常篩選后需保存一段時間后才會集中檢測。如果樣本需要經過一定時間的保存時，需要記錄樣本冷凍或冷藏的起始時間、使用時間、保存期間溫度，相關人員均需簽字確認。冷凍或冷藏樣本要在方案要求的保存時間范圍內完成試驗，否則樣本作廢。不同的樣本會有不同的保存條件要求，除了根據臨床常規的樣本保存，還需要遵循試驗方案的規定，如樣本保存不當有可能導致假陰性。如在我院開展的某基因檢測試劑盒臨床試驗，采集的尿液樣本室溫（10℃-30℃）可保存5天，未能及時檢測的樣本需在-80℃條件下保存，并避免重復凍融；用膠體金免疫層析法檢測N-末端腦鈉肽前體的檢測試劑盒，在收集血清或血漿樣本后，一周內進行檢測可存放在2℃-8℃，超過一周后應放于-20℃以下，如采集的標本為靜脈血標本則不能冷凍；石蠟包埋組織樣本一般可在10℃-30℃條件下保存3年，而使用核酸提取試劑提取后的核酸標本，根據不同方案的要求，DNA樣本保存于-20℃以下，RNA樣本保存于-70℃以下，一般不超過6個月，避免反復凍融，凍融次數控制在方案規定次數內。

　　生物樣本的保存設備，如-70℃超低溫冰箱、-20℃低溫冰箱應定期進行維護、檢測和校準，確保專人適時對試驗設施設備進行質量控制檢查，對儀器資料進行歸檔管理。臨床用樣本存放的冰箱多采用節點記錄溫度的方式，可導出形成完整連貫的溫度曲線記錄。試驗樣本保存設備應安裝報警系統，當溫控探頭記錄的溫度超過設定的溫度范圍時，系統即報警提示，并自動發送報警短信通知研究者，監測參數偏離可接受范圍時，應及時采取應急措施，并保存監測和采取應急措施的記錄。

　　相較藥物或器械臨床試驗，IVD臨床試驗的樣本種類多樣，涉及多個科室，留取病例標本各有不同，包括各種血液、體液、病理組織等，數量繁多，各類試驗樣品留取后，保存條件也不盡相同。因此，為保證試驗樣本的正確保存，需要加強對試驗人員的培訓，熟悉臨床試驗方案。主要研究者應制定詳細的職責分工，指定專人負責樣本的保存、分發管理，其他研究者使用樣本進行試驗時必須取得樣本管理員同意，如實填寫出入庫記錄。

　　試驗結束后，檢測剩余樣本可以根據臨床試驗中心常規流程進行銷毀，但需要保留銷毀記錄；也可根據實際需要，統一保存于試驗中心，便于后期項目核查。

　　臨床試驗樣本的運輸

　　對于在研究機構內部進行檢測的樣本，則直接移交給實驗室樣本管理員，移交過程應該符合在臨床試驗方案中的要求，例如避光、室溫、2℃-8℃運輸等。樣本管理員負責核對樣本的信息和狀態，填寫樣本入庫信息。

　　樣本檢測在本機構之外進行時，則一般采用專業的冷鏈運輸公司將研究機構采集到的樣品運送至檢測實驗室。由第三方冷鏈運輸單位運送的樣本應具有實時溫度監控，以監測樣本在運輸過程中是否仍在要求的溫度條件下保存。冷鏈運輸后應提供運送單，包括樣本開始運輸時間和到達檢測實驗室接收后的時間。在此時間范圍內提取溫度監控儀上的溫度記錄，打印保存。如果不使用第三方冷鏈運輸，則需要配備經過國家計量部門定期檢定過的有效的溫度記錄儀對試驗樣品進行實時溫度監控。此外，接收樣本后還需保存運送單和溫度監控記錄。

　　臨床試驗樣本的操作

　　不同檢測樣本的檢測過程應嚴格按照操作說明書及試驗方案進行操作。體外診斷試劑臨床試驗中因涉及到考核試劑、對比試劑、第三方復核試劑，對試驗人員專業素質要求較為嚴格，試驗人員需熟練掌握試驗樣品的規格型號、技術要求以及操作標準。需要選擇臨床檢驗經驗豐富、有資質的專業人員進行實際檢測工作，所有參與試驗的人員必須經過培訓，具備專業資質及培訓記錄證明其能勝任相關工作。

　　臨床試驗開始前，需要充分培訓所有參與試驗的人員，使其熟悉并掌握試驗產品所適用的儀器、技術性能、操作方法、試驗流程等，并確保所有培訓都有培訓記錄。制定標準操作規程，避免不同試驗人員因操作習慣不同導致檢測結果可能發生差異，最大限度控制試驗人為誤差。

　　臨床試驗實施過程中，如遇到疑惑或者需要重點討論解決的問題，也應隨時進行培訓并記錄。如需要，試驗開始之前應做好考核儀器系統的定標和質控，保證結果真實可控。如按照考核試劑說明書相關內容使用定標品進行定標，定標必須通過才可進行下一步操作；規定合適的定標頻率和定標間期；定標后使用質控品進行質控，質控測定值必須處于規定的質控限內，表明質控結果在控；研究者應確保質控呈現預期結果，方可進行下一步操作等。

　　為了實現在不同研究中心和不同研究者之間檢測流程的一致性，可以在正式試驗之前使用考核試劑檢測一定數量的樣本進行預試驗。預試驗為正式試驗的模擬，操作流程與正式試驗完全一致。預試驗可幫助試驗研究人員熟悉試驗操作流程。用于預試驗的樣本不納入全分析集。

　　《體外診斷試劑臨床試驗指導原則》中對新研制體外診斷試劑的臨床試驗明確要求采用試驗用體外診斷試劑與診斷該疾病的“金標準”進行盲法同步比較。在實際操作過程中，可以根據方案要求將原始樣本重新進行樣本編號，去除標識化，樣本編號和原始樣本的樣本條碼號一一對應，所有樣本的信息均可以在本中心LIS或HIS中溯源到檢驗結果。為減少因試驗人員主觀因素導致的結果偏差，試驗樣本管上除樣本編號及其他必要信息外，應無其他可識別受試者身份信息的標記，試驗過程中，實驗人員僅可看到樣本編號。樣本編號對應的受試者信息對考核試劑試驗操作者及病理組織學檢測人員應當保密。

　　在實驗室檢測過程中，操作人員接觸的臨床樣本均視為可能有污染性樣本，需做好防護工作，規避生物風險。具體要求應在實驗室標準操作規程中有相關規定。

　　IVD臨床試驗中的樣本貫穿臨床試驗的始終，樣本的保存、運輸及操作的規范化直接關系試驗結果的真實性和可靠性，與產品最終能否報批息息相關，更直接關系到患者的健康和利益。因此，進行體外診斷試劑臨床試驗的樣本管理，需提高研究人員樣本管理的規范化意識、法規意識，做好試驗前培訓指導工作，嚴格要求，規范管理，才能保證體外診斷試劑臨床試驗結果真實可靠。（作者單位：浙江大學醫學院附屬第二醫院）